The Comparison of 24 and 48 Hours Culture on In vitro Maturation of Oocyte using Menstrual Blood Stem Cells Secretome in Polycystic Ovary

‫زیستشناسی جانوري‪ ،‬سال شانسدهن‪ ،‬ویژهناهه ‪ ،1402‬صفحات ‪95 -105‬‬ ‫هقاله پژوهشی‬ ‫هقایسه کشت ‪ 24‬و ‪ 4۴‬ساعت بر بلوغ آزهایشگاهی تخوک با استفاده از سکرتوم سلولهاي‬ ‫بنیادي هشتق از خوى قاعذگی در تخوذاى پلیکیستیک‬ ‫هیلذا رستگاري‪ ،1‬نسین حیاتی رودباري‪ ،*1‬سویه کاظننژاد‪ ،2‬سهیال انصاريپور‬ ‫‪2‬‬ ‫‪ -1‬گشٍُ صیؼتؿٌبػی‪ٍ ،‬احذ ػلَم ٍ تحویوبت‪ ،‬داًـگبُ آصاد اػالهی‪ ،‬تْشاى‪ ،‬ایشاى‬ ‫‪ -2‬هشًض تحویوبت ثیَتٌٌَلَطی تَلیذهثل‪ ،‬پظٍّـگبُ كيآٍسیّبی ًَیي ػلَم صیؼتی خْبد داًـگبّی‪ ،‬اثي ػیٌب‪ ،‬تْشاى‪ ،‬ایشاى‬ ‫*‬ ‫هؼئَل هٌبتجبت‪hayati@srbiau.ac.ir :‬‬ ‫تبسیخ پزیشؽ‪1402/07/22 :‬‬ ‫تبسیخ دسیبكت‪1402/06/17 :‬‬ ‫‪DOI: 10.22034/ascij.2023.1995987.1533‬‬ ‫چکیذه‬ ‫ًبسثشد ػلَلّبی ثٌیبدی هضاًـیوی سٍؿی ًَیي دسپضؿٌی ثبصػبختی ٍ ًبثبسٍسی هیثبؿذ‪ .‬اخیشا ؿٌی ػبصی ثَػیلِ ػٌشتَم‬ ‫حبكل اص ایي ػلَلّب‪ّ ،‬وچٌیي صهبى ثْیٌِ خْت ًـت‪ ،‬دس ساػتبی ثْجَد ًتبیح ثلَؽ اصهبیـگبّی تخوي (‪ )IVM‬ثَیظُ دس صًبى‬ ‫داسای تخوذاى پلیًیؼتیي (‪ )PCOS‬هَسد تَخِ هشاس گشكتِ اػت‪ّ .‬ذف اص ایي هغبلؼِ هوبیؼِ اثش صهبىّبی ًـت ‪48 ٍ 24‬‬ ‫ػبػت ثش ‪ IVM‬ثب اػتلبدُ اص ػٌشتَم ػلَلّبی ثٌیبدی خَى هبػذگی (‪ّ )MenSCs‬وشاُ ثب هبیغ كَلیٌَلی ٍ هالتًَیي دس صًبى‬ ‫‪ PCOS‬هیثبؿذ‪ 400 .‬تخوي ًبثبلؾ طسهیٌبل ٍصیٌَل اص ‪ 100‬ثیوبس ‪ ،PCOS‬ثؼٌَاى ثْتشیي ًبًذیذ خْت اًدبم ‪ ،IVM‬خوغآٍسی‬ ‫ٍ ثِ عَس تلبدكی دس چْبس گشٍُ ًٌتشل‪ ،‬ػٌشٍتَم‪ ،‬هبیغ كَلیٌَلی ٍ هالتًَیي توؼین ؿذًذ‪ .‬ثلَؽ تخوي دس صهبىّبی ‪48 ٍ 24‬‬ ‫ػبػت هَسد ثشسػی هشاس گشكت‪ّ .‬وچٌیي تبثیش ػي ثیوبساى ثش ًتیدِ هغبلؼِ دس سدُّبی ػٌی صیش ‪ ٍ 30‬ثبالی ‪ 30‬ػبل دس ّش دٍ‬ ‫ثبصُ صهبًی هَسد اسصیبثی هشاس گشكت‪ .‬هیضاى ثلَؽ تخوي دس صهبى ‪ 24‬ػبػت دس گشٍُ ؿٌی ؿذُ ثب ػٌشتَم ًؼجت ثِ ًٌتشل اكضایؾ‬ ‫هؼٌیداسی ًـبى داد (‪ّ .)p > 0/05‬وچٌیي دس ‪ 48‬ػبػت اكضایؾ ثلَؽ تخوي دس گشٍُ ؿٌی ؿذُ ثب هالتًَیي‪ ،‬ثؼٌَاى یي‬ ‫آًتیاًؼیذاًت هَثش‪ً ،‬ؼجت ثِ ًٌتشل هؼٌیداس ثَد (‪ .)p > 0/001‬یؼالٍُ عجن یبكتِّبی ایي پظٍّؾ ػي خبًن تبثیش هبثل تَخْی‬ ‫دس هیضاى ثلَؽ تخوي دس ًـت ‪ 24‬ػبػت ًذاؿت دس حبلیٌِ دس ‪ 48‬ػبػت دس گشٍُ ػٌی خَاىتش هیضاى ثلَؽ تخوي دس گشٍُ‬ ‫ػٌشتَم ٍ گشٍُ هالٍتًَیي ًؼجت ثِ گشٍُ ًٌتشل اكضایؾ هؼٌیداسی داؿت‪ .‬دس ًتیدِ صهبى ًـت ‪ 24‬ػبػت ثْوشاُ هحیظ ‪IVM‬‬ ‫ؿٌی ؿذُ تَػظ ػٌشتَم صهبًی ثْیٌِ دس ساػتبی اكضایؾ ثلَؽ تخوي دس صًبى ‪ PCOS‬هیثبؿذ‪ّ .‬وچٌیي اػتلبدُ اص هالتًَیي‬ ‫اػتشاتظی هَثشی ثشای ثْجَد ثلَؽ تخوي دس صهبىّبی ًـت عَالًیتش ثِ ًظش هیسػذ‪.‬‬ ‫کلوات کلیذي‪ :‬ػٌشتَم‪ ،‬ػلَلّبی ثٌیبدی خَى هبػذگی‪ ،‬ثلَؽ آصهبیـگبّی تخوي‪ ،‬هالتًَیي‪ ،‬هبیغ كَلیٌَلی‪ ،‬تخوذاى پلیًیؼتیي‪.‬‬ ‫هقذهه‬ ‫یٌی اص تٌٌیيّبی ًويثبسٍسی ثلَؽ آصهبیـگبّی‬ ‫تخوذاى پلیًیؼتیي (‪ّ )PCOS‬وَاسُ چبلـی پیؾ‬ ‫تخوي )‪ (IVM‬هیثبؿذ ًِ ًیبص ثِ اػتلبدُ اص تحشیي‬ ‫سٍی پضؿٌبى حَصُ ًبثبسٍسی هشاس هیدٌّذ‪ .‬ایي اكشاد‬ ‫ًٌتشل ؿذُ تخويگزاسی سا ثشای اًدبم لوبح‬ ‫ًِ پبػخّبی گًَبگًَی ثِ تحشیي گٌبدٍتشٍپیٌی دادُ‬ ‫آصهبیـگبّی )‪ (IVF‬هشتلغ هیػبصد‪ .‬صًبى دسگیش‬ ‫ٍ دسهؼشم خغش ػٌذسم تحشیي ثیؾ اص حذ تخوذاى‬ ‫‪54‬‬ ‫زیستشناسی جانوري‪ ،‬سال شانسدهن‪ ،‬ویژهناهه ‪ ،1402‬صفحات ‪ ،95 -105‬هیلذا رستگاري و هوکاراى‬ ‫)‪ (OHSS‬هیثبؿٌذ‪ ،‬ثَاػغِ تؼذاد تخويّبی صیبد ٍ‬ ‫دس اى هشاس دادُ هیؿَد ػجت تَلیذ سادیٌبلّبی آصاد‬ ‫ًبثبلؾ ثْتشیي ًبًذیذ ‪ IVM‬دس تحویوبت هحؼَة‬ ‫هیؿَد ایذُ اكضٍدى آًتیاًؼیذاًتّب دس ساػتبی‬ ‫هیؿًَذ (‪ .)19 ،17‬خْت اكضایؾ ؿبیؼتگی‬ ‫سػیذى ثِ هحیغی هٌبػتتش خْت ًـت تخوي‬ ‫تخويّبی ثبلؾ ؿذُ حبكل اص ‪ IVM‬ػیؼتنّبی‬ ‫تَػظ ػذُای اص هحوویي ثِ ثَتِ اصهبیؾ گزاؿتِ ؿذ‪.‬‬ ‫ًـت هٌبػت هَسد ًیبص اػت ًِ حوبیت ًٌٌذُ ثلَؽ‬ ‫ًیٌوشد ٍ ّوٌبساى ٍ ‪ّ ٍ Li‬وٌبساى دس‪2017 ٍ 2016‬‬ ‫ّؼتِای ٍ ػیتَپالػوی تخويّب ثبؿذ (‪ .)9‬تبًٌَى‬ ‫اثش اكضٍدى هالتًَیي ثب ؿلظتّبی هختلق ثِ هحیظ‬ ‫هحیظّبی ًـت حبٍی هَاد هختلق دس هغبلؼبت‬ ‫ثلَؽ تخوي ثِ تشتیت دس هذلّبی هَؿی ‪ٍ PCO‬‬ ‫اًؼبًی ٍ حیَاًی هَسد ثشسػی هشاس گشكتِ اػت ًِ اص‬ ‫اًؼبى سا هَسد ثشسػی هشاس دادُ ٍ ًـبى دادًذ ًِ‬ ‫خولِ آى هیتَاى ثِ تشًیجبتی ّوچَى كبًتَسّبی سؿذ‬ ‫ثشخی ؿلظتّبی اػتلبدُ ؿذُ اص هالتًَیي پتبًؼیل‬ ‫ٍ َّسهَىّبی هختلق اؿبسُ ًشد‪ .‬ثب ظَْس پضؿٌی‬ ‫الوبی ثلَؽ ّؼتِای ٍ تضویي لوبح سا داسد (‪.)16 ،10‬‬ ‫ثبصػبختی ٍ اػتلبدُ اص ػلَلّبی ثٌیبدی ٍ ًـق‬ ‫اص دیگش كبًتَسّبی هَثش دس هیضاى هَكویت دس ثلَؽ‬ ‫اثشات هلیذ تشًیجبت هتشؿحِ اص آًْب‪ ،‬هحووبى اثش‬ ‫اصهبیـگبّی تخوي كبًتَس صهبى هیثبؿذ‪ .‬دس یي‬ ‫اًَاػی اص ایي هحیظّب ّوچَى هحیظ ًـت‬ ‫ػشی اص هغبلؼبت صهبى ‪ 24‬ػبػت ثشای ثلَؽ تخوي‬ ‫ػلَلّبی ثٌیبدی هـض اػتخَاى ٍ خٌیٌی ٍ ثٌذ ًبف سا‬ ‫گضاسؽ ؿذُ اهب اؿلت هغبلؼبت اظْبس هیٌٌٌذ ًِ ًتبیح‬ ‫ثؼٌَاى ؿٌی ًٌٌذُ ثش ثلَؽ اصهبیـگبّی تخوي هَسد‬ ‫دس ًـت ‪ 48‬ػبػتِ هبثل هجَل تش خَاّذ ثَد (‪.)13‬‬ ‫ثشسػی هشاس دادًذ ًِ ًتبیح سضبیتثخـی دساكضایؾ‬ ‫ّذف اص تحوین حبضش ثشسػی اكضایؾ تذسیدی هیضاى‬ ‫هیضاى ثلَؽ تخوي‪ ،‬لوبح ٍ تـٌیل خٌیي حبكل ؿذ‬ ‫ثلَؽ تخوي ثب تللین هحیظ ًـت ػلَلّبی ثٌیبدی‬ ‫(‪ .)15 ،8 ،2‬ػلَلّبی ثٌیبدی هضاًـیوی ػالٍُ ثش‬ ‫هـتن اص خَى هبػذگی ٍ هبیغ كَلیٌَلی ٍ هالتًَیي‬ ‫خبكیت خَدًَصایی ٍ ٍیظگیّبی تٌثیشی ٍ توبیضی‬ ‫دس صهبىّبی ‪ 48 ٍ 24‬ػبػت دس ثیوبساى‬ ‫ٍیظُ هیتَاًٌذ اًَاػی اص كبًتَسّبی سؿذ‪ ،‬ػیتًَیيّب‬ ‫‪PCOS‬هیثبؿذ‪ّ .‬وچٌیي ثب تَخِ ثِ ثبصُ ػٌی اًتخبة‬ ‫ٍ تشًیجبت كؼبل ثیَلَطیٌی سا تَلیذ ًٌٌذ ٍ ثَاػغِ‬ ‫ؿذُ هیضاى اثش ثخؾ ایي سٍؽّب دس دٍ گشٍُ ػٌی‬ ‫اثشات پبساًشایٌی ثلَؽ اصهبیـگبّی تخوي سا ثْجَد‬ ‫صیش ‪ 30‬ػبل ٍ ثبالی ‪ 30‬ػبل هَسد ثشسػی هشاس‬ ‫ثجخـٌذ‪ .‬یٌی اص هٌبثغ ػلَلّبی ثٌیبدی ًِ اخیشا‬ ‫گشكت‪.‬‬ ‫ثخلَف دس پضؿٌی ثبصػبختی ثؼیبس هَسد تَخِ‬ ‫هواد و روشها‬ ‫هشاس گشكتِ اػت ػلَلّبی ثٌیبدی هـتن اص خَى‬ ‫ایي هغبلؼِ تدشثی ثش سٍی ‪ 100‬ثیوبس صى ‪ 20‬تب ‪40‬‬ ‫هبػذگی (‪ )MenSCs‬هیثبؿذ ًِ ػالٍُ ثش خَاف رًش‬ ‫ػبلِ هجتال ثِ ػٌذسم تخوذاى پلیًیؼتیي )‪ (PCOS‬اص‬ ‫ؿذُ ثِ ػلت سٍؽ خوغ اٍسی اػبى ٍ ؿیشتْبخوی‬ ‫هشًض ًبثبسٍسی اثي ػیٌب (تْشاى‪ ،‬ایشاى) عی یي ػبل‬ ‫یٌی اص هٌبثغ ػلَلی پیـشٍ هحؼَة ؿذُ ٍ دس دسهبى‬ ‫اًدبم ؿذ‪ .‬تـخیق ػٌذسم تخوذاى پلیًیؼتیي ثش‬ ‫ثؼیبسی اص ثیوبسیّب اثشات هثجت هبثل تَخْی ًـبى‬ ‫اػبع هؼیبسّبی اًدوي تَلیذهثل اًؼبى ٍ خٌیي‪-‬‬ ‫دادُ اػت (‪ّ .)3‬وچٌیي اثش اػتلبدُ اص تشًیجبت هـزی‬ ‫ؿٌبػی اسٍپبیی سٍتشدام‪/‬اًدوي پضؿٌی تَلیذهثل‬ ‫ّوچَى هبیغ كَلیٌَلی ًیض ثش ثلَؽ آصهبیـگبّی‬ ‫آهشیٌب دس ػبل ‪( 2003‬تخوذاى پلیًیؼتیي‪ ،‬اٍلیگَ‪-‬‬ ‫تخوي هَسد ثشسػی هشاس گشكتِ اػت (‪ .)14‬اص آًدبیی‬ ‫یب ػذم تخويگزاسی ٍ ؿَاّذ ثبلیٌی یب ثیَؿیویبیی‬ ‫ًِ هحیظ ًـت تخوي ٍ ًیض هذت صهبًی ًِ تخوي‬ ‫‪55‬‬ ‫زیستشناسی جانوري‪ ،‬سال شانسدهن‪ ،‬ویژهناهه ‪ ،1402‬صفحات ‪ ،95 -105‬هیلذا رستگاري و هوکاراى‬ ‫ّیپشآًذسٍطًیؼن) ثَد‪ .‬هؼیبسّبی ٍاخذ ؿشایظ ثَدى‬ ‫ًِ كشیض ؿذُ ثَدًذ رٍة ؿذُ ٍ ًـت دادُ ؿذًذ تب‬ ‫صًبى ‪ PCOS‬ثب ػي ًوتش اص ‪ ≥ 40‬ػبل‪ ،‬حذاهل چْبس‬ ‫(‪)DMEM-F12‬‬ ‫ثِ ؿلظت ‪ 70‬دسكذ دس هحیظ‬ ‫تخوي طسهیٌبل ٍصیٌَل )‪ ٍ (GV‬ػغح َّسهَى آًتی‪-‬‬ ‫حبٍی ‪ Dulbecco's platelet lysate‬ثشػٌذ (ؿٌل ‪. )2‬‬ ‫هَلشیي )‪ ( AMH‬ثبالتش اص ‪ً 1.3‬بًَگشم دس هیلیلیتش‬ ‫هحیظ اضبكی دٍس سیختِ ؿذُ ٍ ػلَلّب دس هحیظ‬ ‫ثَد‪ .‬هؼیبسّبی خشٍج ؿبهل اًذٍهتشیَص‪ً ،‬شٍهَصٍم‪-‬‬ ‫)‪ )DMEM-F12‬كبهذ كٌَل دس دهبی ‪ 37‬دسخِ ٍ ‪5‬‬ ‫ّبی ؿیشعجیؼی‪ ،‬پبػخ ضؼیق تخوذاًی‪ ،‬ػذم تخوي‪-‬‬ ‫دسكذ دی اًؼیذ ًشثي ثِ هذت ‪ 48‬تب ‪ 72‬ػبػت‬ ‫گزاسی ٍ ثیوبسی هضهي ػلًَی ثَد‪ .‬ػبخت ػلَل ثب‬ ‫اًٌَثِ ؿذًذ‪ .‬پغ اص آى‪ ،‬هبیغ سٍیی هجل اص ػبًتشیلیَط‬ ‫تبییذ ػبصهبى ؿزا ٍ داسٍی ایشاى دس ‪( STERCO‬ایشاى‪،‬‬ ‫ؿذى ثب ػشػت ‪ 2000‬دٍس دس دهیوِ ثِ هذت ‪ 5‬دهیوِ‬ ‫تْشاى) دس اتبم تویض ‪ GMP‬تٌویل ؿذ‪ّ .‬وِ ؿشًت‪-‬‬ ‫دس دهبی اتبم‪ ،‬اص عشین كیلتش ػشًگ ‪ 0/2‬هیٌشٍهتشی‬ ‫ًٌٌذگبى هجل اص ؿشٍع هغبلؼِ پغ اص تَضیح دهین‬ ‫كیلتش ؿذ‪ .‬ػپغ‪ ،‬هبیغ سٍیی ثشای ثِ دػت آٍسدى‬ ‫ؿشایظ‪ ،‬سضبیت ًتجی آگبّبًِ اسائِ ًشدًذ‪ّ .‬وِ‬ ‫ثخؾ هحلَل آػپیشُ ؿذ ٍدس هیٌشٍتیَةّبی ‪5‬‬ ‫ؿشًتًٌٌذگبى پشٍتٌل تحشیي تخوذاى هـبثْی سا ثب‬ ‫هیلیلیتشی ثؼتِثٌذی ٍ رخیشُ ؿذ‪.‬‬ ‫هحشى آگًَیؼت دسیبكت ًشدًذ (ٍاسیَپپتیل ‪، 0/1‬‬ ‫آهادهسازي هایع فولیکولی‪ً :‬وًَِّبی هبیغ كَلیٌَلی‬ ‫ایشاى)‪ .‬پغ اص تحشیي َّسهًَی‪ ،‬تخويّبی ثبلؾ‬ ‫)‪ ) FF‬اص دُ خبًن صیش ‪ 35‬ػبل ػبلن ٍ ثذٍى ػٌذسم‬ ‫هتبكبص دٍ ٍ ًبثبلؾ هتبكبص یي ٍ (‪ ًِ )GV‬اص عشین ػول‬ ‫تخوذاى پلیًیؼتیي یب ًبثبسٍسی ثب ػبهل صًبًِ ًِ ٍاسد‬ ‫تخويگیشی حبكل ؿذًذ ثشسػی ؿذُ‪ .‬تخويّبی‬ ‫ػیٌل‬ ‫ثبلؾ ثشای ػیٌل دسهبًی ثیوبساى اػتلبدُ ؿذًذ‪.‬‬ ‫‪ IVF‬ؿذُ ثَدًذ خوغآٍسی ؿذ‪ FF .‬دس‬ ‫‪ ×1000‬گشم ٍ‪ 4‬دسخِ ػبًتیگشاد ثِ هذت پٌح دهیوِ‬ ‫تخويّبی ًبثبلؾ ًِ ًیلیت هبثل هجَلی داؿتٌذ‬ ‫ػبًتشیلیَط ؿذ ٍ ػپغ هبیغ سٍیی دس یي لَلِ تویض ٍ‬ ‫ثلَست هضشثی اص چْبس ثشای تَصیغ ثیي گشٍُّبی‬ ‫خذیذ خوغآٍسی ؿذ ٍ اص عشین كیلتشّبی‪0/22‬‬ ‫آصهبیؾ هَسد اػتلبدُ هشاس گشكتٌذ ٍ حذاهل ‪ 4‬تخوي‬ ‫هیٌشٍهتش (كیلتش ػشًگ هحلَل ؿـبیی‪ ،‬ایبالت هتحذُ‬ ‫‪IVM‬‬ ‫آهشیٌب) كیلتش ؿذ‪ .‬ػپغ ‪ FF‬خذا ؿذ ٍ دس ‪ 20-‬دسخِ‬ ‫(‪ )GV‬اص ّش ثیوبس ثغَس تلبدكی ثِ چْبس گشٍُ‬ ‫اختلبف دادُ ؿذًذ‪ .‬ػپغ دسكذ تخويّبی ثبلؾ‬ ‫ػبًتیگشاد ثشای اػتلبدُ ثؼذی ًگْذاسی ؿذ‪.‬‬ ‫ثیي گشٍُّبی ‪ IVM‬دس دٍ صهبى ‪ 48 ٍ 24‬ػبػت‬ ‫بلوغ آزهایشگاهی تخوک (‪ 36 :)IVM‬تب ‪ 38‬ػبػت‬ ‫هوبیؼِ ؿذ‪ .‬عشاحی هغبلؼِ دس ؿٌل ‪ 1‬ثِ تلَیش‬ ‫پغ اص تحشیي‪ ،‬كَلیٌَلّب تحت ّذایت ػًََگشاكی‬ ‫ًـیذُ ؿذُ اػت (ؿٌل ‪.)1‬‬ ‫خبسج ؿذًذ‪ .‬پغ اص آى ثشای ثشٌِّ ًشدى تخويّب‬ ‫تهیه سکرتوم سلولهاي بنیادي خوى قاعذگی‪:‬‬ ‫آًضین ّیبلَسًٍیذاص ‪80‬‬ ‫ػلَلّبی ثٌیبدی خَى هبػذگی عجن سٍؽ هَسد‬ ‫‪Copper ،SAGE( U/ML‬‬ ‫‪ ،Surgical‬آهشیٌب) ثِ هذت ‪ 30‬ثبًیِ اػتلبدُ ؿذ‪.‬‬ ‫اػتلبدُ تَػظ ظلشدٍػت ٍ ّوٌبساى دس ػبل ‪2020‬‬ ‫ػپغ تخويّبی آهبدُ ؿذُ ثشای ثشسػی ثیـتش ثِ‬ ‫ًـت دادُ ؿذًذ (‪ .)22‬ایي ػلَلّب اص ثبًي ػلَلی‬ ‫یي ظشف حبٍی هحیظ ًـت پبیِ آصهبیـگبُ ًِ دس‬ ‫ًِ اصخَى هبػذگی حذاهل ‪ 5‬صى ػبلن خوغآٍسی ؿذُ‬ ‫ؿشایظ ػبدی ثؼٌَاى هحیظ ًـت ثلَؽ تخوي اػتلبدُ‬ ‫ٍ اص ًظشػذم الَدگی ثبًتشیبیی ٍ هبسچی هَسد تبییذ‬ ‫هیؿَد (‪ ،ORIGIO ،CLEAV‬داًوبسى) هٌتول ؿذًذ‪.‬‬ ‫ثَد‪ ،‬تْیِ ؿذًذ‪ .‬ػٌشتَم ػلَلی عجن پشٍتٌل هجلی هب‬ ‫هشحلِ ثلَؽ هیَصی ّش تخوي ‪ MI ،GV‬یب ‪ MII‬دس‬ ‫تْیِ ؿذ (‪ .)5‬ػلَلّبی ثٌیبدی هـتن اص خَى هبػذگی‬ ‫صیش هیٌشٍػٌَح هـخق ؿذ‪ .‬تخويّبی‬ ‫‪59‬‬ ‫‪GV‬‬ ‫زیستشناسی جانوري‪ ،‬سال شانسدهن‪ ،‬ویژهناهه ‪ ،1402‬صفحات ‪ ،95 -105‬هیلذا رستگاري و هوکاراى‬ ‫ًبهٌبػت اص ًظش ؿٌل ٍ ًیلیت اص هغبلؼِ خبسج‬ ‫ًـت تخويّب دس ؿشایظ ‪ 6‬دسكذ ‪20( ٍ CO2‬‬ ‫ؿذًذ‪ .‬تخويّبی ‪ GV‬تبصُ ثِدػتآهذُ ًِ ًیلیت‬ ‫دسكذ اًؼیظى) دس یي هحیظ هشعَة ثشای دٍ ثبصُ‬ ‫هبثل هجَلی داؿتٌذ ثِعَس تلبدكی ثِ چْبس گشٍُ‬ ‫صهبًی ‪ 48 ٍ 24‬ػبػت اًدبم ؿذ‪ .‬ظَْس گَیچِ هغجی‬ ‫هذاخلِ هدضا توؼین ؿذًذ‪ 40 -1 :‬دسكذ ػٌشتَم‬ ‫ًِ ًـبىدٌّذُ ثلَؽ ّؼتِای تخوي ٍ هشحلِ هتبكبص‬ ‫‪ 60+‬دسكذ هحیظ ًلیَ (گشٍُ ػٌشتَم)‪40 -2 ،‬‬ ‫دٍ هیثبؿذ‪ ،‬پغ اص ‪ 48 ٍ 24‬ػبػت اص عشین‬ ‫دسكذ ػٌشتَم ‪ 50 +‬دسكذ هحیظ ًلیَ ‪ 10 +‬دسكذ‬ ‫اػتشیَهیٌشٍػٌَح (‪ ،SMZ800N ،Nikon‬طاپي)‬ ‫هبیغ كَلیٌَلی( گشٍُ هبیغ كَلیٌَلی)‪ 40 -3 ،‬دسكذ‬ ‫هَسد ثشسػی هشاس گشكت‪ّ .‬وچٌیي هوبیؼِ ًتبیح ثش‬ ‫ػٌشتَم ‪ 50+‬دسكذ هحیظ ًلیَحبٍی هالتًَیي ثب‬ ‫اػبع ػي ؿشًتًٌٌذُّب دس سدُّبی ػٌی صیش ‪30‬‬ ‫ؿلظت ‪ 10 + 10-8‬دسكذ هبیغ كَلیٌَلی (گشٍُ‬ ‫ػبل ٍ ثبالی ‪ 30‬ػبل دس ّش دٍ ثبصُ صهبًی رًش ؿذُ‬ ‫هالتًَیي( ٍ ‪ -4‬گشٍُ ًٌتشل (هحیظ ًلیَ ًِ هحیظ‬ ‫اًدبم ؿذ‪.‬‬ ‫سٍتیي ٍ پبیِ آصهبیـگبُ ثشای ًـت ٍ ثلَؽ تخوي‬ ‫تجسیه و تحلیل آهاري‪ :‬ثب اػتلبدُ اص ‪ً SPSS‬ؼخِ ‪18‬‬ ‫هیثبؿذ)‪ .‬ؿلظتّبی اًتخبثی خْت ػٌشتَم‪ ،‬هبیغ‬ ‫ٍ سػن ًوَداسّب ثَػیلِ ًشماكضاس‬ ‫كَلیٌَلی ٍ هالتًَیي ثش اػبع ًتبیح سضبیتجخؾ‬ ‫‪Graphpad PRISM‬‬ ‫‪ 9.4.1‬اًدبم ؿذ‪.‬‬ ‫حبكل اص هغبلؼبت كَست گشكت (‪.)14 ،10 ،8‬‬ ‫ؿٌل ‪ -1‬عشاحی هغبلؼِ‪ .‬ػلَلّب اص ثبًي ػلَل ثٌیبدی تْیِ ؿذًذ‪ .‬پغ اص ًـت ػلَل ٍ خذاػبصی ػٌشتَم ػلَلّبی ثٌیبدی‬ ‫هـتن اص خَى هبػذگی‪ ،‬اكضٍدى تشًیجبت هـزی اص خولِ ػٌشتَم‪ ،‬هبیغ كَلیٌَلی ٍ هالتًَیي ثِ هحیظ ثلَؽ آصهبیـگبّی تخوي‬ ‫كَست گشكتِ ٍ ثب ًـت دس صهبىّبی ‪ 48 ٍ 24‬ػبػت هیضاى ثلَؽ تخوي دس ػٌیي هختلق هَسد اسصیبثی هشاس گشكت‪.‬‬ ‫نتایج‬ ‫ًؼجت ثِ گشٍُ ًٌتشل هؼٌیداس ثَد (‪ 51‬دسكذ دس‬ ‫نتایج هیساى بلوغ تخوک در گروههاي هذاخله‪:‬‬ ‫هوبثل ‪ 36‬دسكذ‪ ،)p ; 0/03 ،‬هیضاى ثلَؽ تخن دس گشٍُ‬ ‫ّوبًغَس ًِ دس خذٍل ‪ً ٍ 1‬وَداس ‪ً 1‬ـبى دادُ ؿذُ‬ ‫هالتًَیي ‪ 49‬دسكذ ثَد ًِ دس هوبیؼِ ثب گشٍُ ًٌتشل‬ ‫اػت‪ ،‬دس ّش ػِ گشٍُ هذاخلِ دس هوبیؼِ ثب گشٍُ‬ ‫ًضدیي ثِ هؼٌیداسی ثَد (‪ ٍ )p ;0/06‬دسگشٍُ هبیغ‬ ‫ًٌتشل‪ ،‬هیضاى ثلَؽ تخوي ثؼذ اص‪ 24‬ػبػت ثْجَد‬ ‫كَلیٌَلی ‪ 46‬دسكذ ثَد ًِ دس هوبیؼِ ثبًٌتشل هؼٌی‪-‬‬ ‫یبكت‪ .‬اهب ایي تلبٍت تٌْب دس گشٍُ تحت دسهبى ثب‬ ‫داس ًجَد (‪ .)p = 0/15‬ػلیشؿن ثْجَد دس توبهی‬ ‫ػٌشتَم ػلَلّبی ثٌیبدی هـتن اص خَى هبػذگی‬ ‫‪59‬‬ ‫زیستشناسی جانوري‪ ،‬سال شانسدهن‪ ،‬ویژهناهه ‪ ،1402‬صفحات ‪ ،95 -105‬هیلذا رستگاري و هوکاراى‬ ‫گشٍُّبی دسهبًی ًؼجت ثِ گشٍُ ًٌتشل‪ ،‬تلبٍت‬ ‫اص گشٍُّبی هذاخلِ ًؼجت ثِ گشٍُ ًٌتشل تلبٍت‬ ‫هؼٌیداسی دس هیضاى ثلَؽ دس ثیي گشٍُّبی هذاخلِ‬ ‫هؼٌیداسی ٍخَد ًذاؿت (‪ّ .)p; 0/60‬وچٌیي ثیي‬ ‫ثلَست هوبیؼِ دٍ ثِ دٍ هـبّذُ ًـذ‪ .‬دس ثبصُ صهبًی‬ ‫ّیچٌذام اص گشٍُّب دس هوبیؼِ دٍ ثِ دٍ ًیض تلبٍت‬ ‫‪ 48‬ػبػت هیضاى ثلَؽ تخوي دس گشٍُ هالتًَیي‬ ‫هؼٌیداسًجَد‪ّ .‬وچٌیي ًتبیح هـبثْی دس گشٍُ ػٌی‬ ‫‪p‬‬ ‫ثبالی ‪ 30‬ػبل هـبّذُ ؿذ (‪ .)p ; 0/22‬اهب دس ثبصُ‬ ‫=) دس حبلیٌِ دس دٍ گشٍُ هذاخلِ دیگش یؼٌی ػٌشتَم‬ ‫صهبًی ‪ 48‬ػبػتِ ثشای اكشاد صیش ‪ 30‬ػبل دس گشٍُ‬ ‫ٍ گشٍُ هبیغ كَلیٌَلی ثْوشاُ ػٌشتَم تلبٍت‬ ‫حبٍی ػٌشتَم ٍ هالتًَیي هیضاى ثلَؽ تخوي ًؼجت‬ ‫هؼٌیداسی ًؼجت ثِ ًٌتشل ٍخَد ًذاؿت‪ ،‬ثِ تشتیت‬ ‫ثِ گشٍُ ًٌتشل تلبٍت هؼٌیداسی ًـبى داد (‪0/01‬‬ ‫;‪p‬‬ ‫(‪( )p ; 0/10( ٍ )p = 0/79‬خذٍل‪.)1‬‬ ‫) دس حبلیٌِ ثشای صًبى ثبالی ‪ 30‬ػبل دس ایي ثبصُ‬ ‫نتایج هقایسه بلوغ تخوک در گروههایی سنی زیر‬ ‫صهبًی اص ًظش هیضاى ثلَؽ تخوي ثیي گشٍُّب ٍ دس‬ ‫ثیـتشیي تلبٍت سا ًؼجت ثِ ًٌتشل ًـبى داد (‪0/004‬‬ ‫هوبیؼِ ثب ًٌتشل تلبٍت هؼٌیداسی ٍخَد ًذاؿت‬ ‫‪ 30‬سال و باالي ‪ 30‬سال در زهاى هاي ‪ 24‬و ‪4۴‬‬ ‫(‪;0/80‬‬ ‫ساعت‪ :‬دس گشٍُ ػٌی ثیي ‪ 20‬تب ‪ 29‬ػبل دس ّیچٌذام‬ ‫‪ً()p‬وَداسّبی‬ ‫‪2‬‬ ‫ٍ‬ ‫‪.)3‬‬ ‫ؿٌل ‪ -2‬هَسكَلَطی ػلَلّبی ثٌیبدی هـتن اص خَى هبػذگی پغ اص پبػبط ٍ سػیذى ثِ ؿلظت هٌبػت (‪.) × 100‬‬ ‫خذٍل ‪ -1‬هوبیؼِ هیضاى ثلَؽ تخوي پغ اص ‪ 48 ٍ 24‬ػبػت دس دس گشٍُّبی هذاخلِ حبٍی هحیظ ًـت ؿٌی ؿذُ ٍ هوبیؼِ ثب‬ ‫گشٍُ ًٌتشل حبٍی هحیظ سٍتیي اصهبیـگبُ‪.‬‬ ‫گشٍُ‬ ‫هالتًَیي (هالتًَیي‪،‬‬ ‫گشٍُ هبیغ كَلیٌَلی‬ ‫هبیغ كَلیٌَلی ٍ ػٌشتَم)‬ ‫(هبیغ كَلیٌَلی ٍ ػٌشتَم)‬ ‫گشٍُ ػٌشتَم‬ ‫گشٍُ ًٌتشل‬ ‫گشٍُّب‬ ‫‪n =100‬‬ ‫‪n =100‬‬ ‫‪n =100‬‬ ‫‪n = 100‬‬ ‫تؼذاد تخوي‬ ‫)‪49 (p= 0/063 vs. C‬‬ ‫)‪46 (p= 0/151 vs. C‬‬ ‫)‪51 (p= 0/032 vs. C‬‬ ‫‪36‬‬ ‫هیضاى ثلَؽ دس ‪ 24‬ػبػت (دسكذ)‬ ‫)‪76 (p=0/004 vs. C‬‬ ‫)‪68 (p= 0/108 vs. C‬‬ ‫)‪69 (p=0/79 vs. C‬‬ ‫‪57‬‬ ‫هیضاى ثلَؽ دس ‪ 48‬ػبػت (دسكذ)‬ ‫‪55‬‬ ‫زیستشناسی جانوري‪ ،‬سال شانسدهن‪ ،‬ویژهناهه ‪ ،1402‬صفحات ‪ ،95 -105‬هیلذا رستگاري و هوکاراى‬ ‫ًوَداس ‪ -1‬هوبیؼِ هیضاى ثلَؽ آصهبیـگبّی تخوي دس ثبصُّبی صهبًی ‪ 48 ٍ 24‬ػبػت دس گشٍُّبی هَسد آصهبیؾ ٍ هوبیؼِ ثب‬ ‫گشٍُ ًٌتشل (* ‪.)p > 0/001 *** ،p > 0/01 ** ،p > 0/05‬‬ ‫ًوَداس ‪ -2‬هوبیؼِ هیضاى ثلَؽ تخوي دس صًبى صیش ‪ 30‬ػبل ٍ ثبالی ‪ 30‬ػبل دس ثبصُ صهبًی ‪ 24‬ػبػت ًـت دس گشٍُّبی هَسد‬ ‫آصهبیؾ ٍ هوبیؼِ ثب گشٍُ ًٌتشل (* ‪.)p > 0/001 *** ،p > 0/01 ** ،p > 0/05‬‬ ‫ًوَداس ‪ -3‬هوبیؼِ هیضاى ثلَؽ تخوي دس صًبى صیش ‪ 30‬ػبل ٍ ثبالی ‪ 30‬ػبل دس ثبصُ صهبًی ‪ 48‬ػبػت ًـت دس گشٍُّبی هَسد‬ ‫آصهبیؾ ٍ هوبیؼِ ثب گشٍُ ًٌتشل (* ‪.)p > 0/05‬‬ ‫‪011‬‬ ‫زیستشناسی جانوري‪ ،‬سال شانسدهن‪ ،‬ویژهناهه ‪ ،1402‬صفحات ‪ ،95 -105‬هیلذا رستگاري و هوکاراى‬ ‫بحث‬ ‫ثلَؽ آصهبیـگبّی تخوي یٌی اص سٍؽّبی ًوي‬ ‫هَضَع هیتَاًذ ثِ ػلت اثشات هْبس ًٌٌذگی اًَاػی‬ ‫ثبسٍسی ثب تبسیخچِ عَالًیؼت ًِ ثؼٌَاى سٍؿی ایوي‬ ‫اص كبًتَس ّبی سؿذ هَخَد دس هبیغ كَلیٌَلی ثش‬ ‫ٍ آػبى ثَیظُ ثشای حلظ ثبسٍسی دس صًبى ؿٌبختِ‬ ‫تشًیجبت هَخَد دس ػٌشتَم ثبؿذ ًِ ّوؼَ ثب ًتبیح‬ ‫هیؿَد (‪ .)20‬ػلیشؿن اػتلبدُ اص تشًیجبت هختلق‬ ‫حبكل اص هغبلؼِ ای هـبثِ ثب اػتلبدُ اص‪ ٪ 40‬هبیغ‬ ‫ٌَّص ًوغِ ػغلی ثشای ثْجَد ًیلیت تخوي ثب ثْجَد‬ ‫كَلیٌَلی صًبى ؿیش ‪ PCO‬دس هحیظ ًـت هیثبؿذ(‪.)4‬‬ ‫هحیظ ًـت ایدبد ًـذُ اػت‪ّ .‬ذف اص ایي هغبلؼِ‬ ‫اهب دادُ ّبی حبكل اص ًـت ‪ 48‬ػبػتِ ًـبى داد ًِ‬ ‫ثشسػی اثش تللیوی تشًیجبت هـزی ثش ثلَؽ آصهبیـٌبّی‬ ‫ؿٌیػبصی هحیظ ثب ػٌشتَم ٍ هبیغ كَلیٌَلی دس هیضاى‬ ‫تخوي دس صهبى ٍ ثبصُ ّبی ػٌی هتلبٍت ثَد‪ .‬یبكتِ‬ ‫ثلَؽ تخوي دس ایي ثبصُ صهبًی تلبٍت هبثل تَخْی‬ ‫ای هب ًـبى داد ًِ ؿٌی ػبصی هحیظ ًـت ثب ػٌشتَم‬ ‫ًؼجت ثِ گشٍُ ًٌتشل ًـبى ًویذّذ ٍ تٌْب دسگشٍُ‬ ‫ػلَلّبی ثٌیبدی خَى هبػذگی ثؼٌَاى یي هٌجغ‬ ‫هالتًَیي هیضاى ثلَؽ تخوي تلبٍت هؼٌیداسی ًؼجت‬ ‫ػلَلی ًَیي ٍ هالتًَیي ثبػـث اكـضایؾ هیـضاى ثلَؽ‬ ‫ثِ ًٌتشل داسد‪ .‬دس ساػتبی ایي اكضایؾ هیتَاى ثِ ایي‬ ‫تخويّبی طسهیٌبل ٍصیٌَل ثِ هتبكبص دٍ دس ػٌذسم‬ ‫ًٌتِ اؿبسُ ًشد ًِ اكضایؾ صهبى ًـت ثبػث اكضایؾ‬ ‫تخوذاى پلیًیؼتیي هیؿَد‪ .‬دس ثخؾ اٍل هغبلؼِ هب‪،‬‬ ‫ػي تخوي ٍ هیضاى اػتشع اًؼیذاتیَ‪ً ،‬بّؾ ًیلیت‬ ‫تلبٍت هؼٌیداسی ثیي تخويّبی تیوبس ؿذُ ثب‬ ‫تخوي ٍ هتؼبهجب ایدبد اًَپلَییذی هیؿَد ٍ گشچِ ثب‬ ‫ػٌشتَم ػلَلّبی ثٌیبدی هـتن اص خَى هبػذگی‬ ‫اكضایؾ صهبى ًـت هوٌي اػت تخويّبی ثبلؾ‬ ‫ًؼجت ثِ گشٍُ ًٌتشل دس ًـت ‪ 24‬ػبػت ثِ دػت‬ ‫ثیـتشی حبكل ؿَد اهب ایي تـییشات اپیطًتیٌی اص‬ ‫آهذ‪ .‬ثشخی هغبلؼبت حبًی اص آى اػت ًِ ؿٌی ػبصی‬ ‫عشین ایي گبهتّب ثَاػغِ سٍؽّبی ًوي ثبسٍسی‬ ‫ثِ ًؼل ثؼذی هٌتول ٍ ثبػث هـٌالت ػالهتی هی‪-‬‬ ‫ًـت ‪ IVM‬ثب هحیظ ًـت ػلَلّبی ثٌیبدی‬ ‫هضاًـیوی هی تَاًذ هیضاى ثلَؽ تخوي سا ثْجَد ثخـذ‬ ‫گشدد (‪.)12 ،7‬‬ ‫(‪ .)8 ،6 ،1‬ثب ایي حبل‪ ،‬هغبلؼِ هب اٍلیي هَسد اسصیبثی‬ ‫اكضٍدى هالتًَیي ثب ایلبی ًوؾ حزف ًٌٌذُ ‪ّROS‬ب‬ ‫اثش توَیت هحیظ ‪ IVM‬ثب ػٌشتَم هـتن ؿذُ اص‬ ‫ثَیظُ ثب عَالًی تش ؿذى هذت صهبى ًـت‪ ،‬تأثیش‬ ‫ػلَلّبی ثٌیبدی هـتن اص خَى هبػذگی اػت‪.‬‬ ‫هلیذی ثش هیضاى ثلَؽ تخوي داسد چٌبًٌِ هغبلؼبت‬ ‫هٌبًیؼن اػبػی ثشای ایي ثْجَد هوٌي اػت ثِ‬ ‫پیـیي ًـبى دادُ اًذ ًِ هالتًَیي ثِ ػٌَاى یي آًتی‬ ‫ؿٌیػبصی هحیظ ثب ػیتًَیيّب ٍ كبًتَسّبی سؿذ‬ ‫اًؼیذاى ثب اثشات ضذ آپَپتَص ثِ هحیظ ‪ IVM‬حبٍی‬ ‫تشؿح ؿذُ اصایي ػلَلّب هبًٌذ كبًتَس سؿذ‬ ‫‪ FSH ٍ LH‬هیتَاًذ هیضاى ثلَؽ ٍ ًیلیت خٌیي سا‬ ‫كیجشٍثالػت ‪ٍ IL-4 ٍ IL8 ، EGF ، FGF2‬‬ ‫دس صهبى ٍ ؿلظت هتلبٍت ثیي ‪ 5-10‬تب ‪9- 10‬هَالس‬ ‫‪GDNF‬‬ ‫ًؼجت دادُ ؿَد ًِ ًوؾ هْوی دس ػولٌشد تخوذاى ٍ‬ ‫ثْجَد ثخـذ (‪.)16 ،11‬‬ ‫ثلَؽ تخوي داسًذ (‪ .)18 ،3‬دس ػبیش گشٍُّبی هَسد‬ ‫اؿلت هغبلؼبت دس ػٌیي صیش ‪ ٍ 40‬ثبالی ‪ 20‬ػبل‬ ‫آصهبیؾ اص خولِ گشٍُ حبٍی هبیغ كَلیٌَلی ثب ٍخَد‬ ‫اًدبم ؿذُ اهب هب ثبصُای گؼتشدُتش ثیي ‪ 20‬تب ‪ 40‬سا‬ ‫اكضایؾ هیضاى ثلَؽ دس صهبى ‪ 24‬ػبػت ًتبیح هؼٌب‬ ‫هَسد ثشسػی هشاس دادُ ٍ ثب دػتِثٌذی ثِ دٍ گشٍُ تب‬ ‫داسی دس هوبیؼِ ثب گشٍُ ًٌتشل حبكل ًـذ ًِ ایي‬ ‫‪ ٍ 30‬ثبالی ‪ 30‬ػبل استجبط هیضاى ثلَؽ ٍ ػي دس‬ ‫‪010‬‬ ‫زیستشناسی جانوري‪ ،‬سال شانسدهن‪ ،‬ویژهناهه ‪ ،1402‬صفحات ‪ ،95 -105‬هیلذا رستگاري و هوکاراى‬ ‫هحیظّبی ًـت هَسد اػتلبدُ سا هَسد اسصیبثی هشاس‬ ‫‪ 48‬ػبػت هیثبؿذ ًِ پیـتش ثِ تجؼبت هٌلی اى اؿبسُ‬ ‫دادین‪ .‬ثش اػبع هغبلؼبت پیـیي ایٌغَس اػتٌجبط ًِ دس‬ ‫ؿذ (‪ .)13‬اهب ثش اػبع ًتبیح هب ثْتشیي صهبى ثشای‬ ‫صًبى ثبالی ‪ 30‬ػبل ثلَؽ تخوي ًبّؾ هییبثذ اهب دس‬ ‫ثلَؽ اصهبیـگبّی تخوي ثبیذ ثبصُ ای هب ثیي دٍ صهبى‬ ‫ثشسػی دیگش دس ‪ 2021‬دس صًبًی ثب هتَػظ ػي ‪31.8‬‬ ‫ثشسػی ؿذُ دس ًظش گشكتِ ؿَد تب ًِ تٌْب تخوي اص‬ ‫ػبل صهبى ‪ 48 ٍ 24‬ػبػت ثشای ًـت تخوي ثشسػی‬ ‫ًظش ثلَؽ ّؼتِای ثِ هشحلِ هبثل هجَلی ثشػذ ثلٌِ اص‬ ‫ؿذ ٍ هیضاى ثلَؽ دس ‪ 48‬ػبػت ‪ 10‬دسكذ ثیـتش ثَد ٍ‬ ‫ًظش ػیتَ پالػوی ًیض ثبلؾ ؿَد دس حبلیٌِ اص پیش ؿذى‬ ‫كبًتَسّبیی ّوچَى ػي ثیوبس ٍ ػغَح َّسهًَی ثش‬ ‫تخوي ٍ اثشات هٌلی عَالًی ؿذى صهبى ًـت ًیض‬ ‫ثلَؽ ‪ 24‬ػبػتِ اثشی ًذاؿت ًِ ًتبیح هغبلؼِ هب ًیض ثب‬ ‫خلَگیشی ؿَد‪ .‬ػذم ثشسػی هبیغ كَلیٌَلی یب‬ ‫ایي یبكتِ ّوؼَ ثَد ٍ ًـبى داد دس گشٍُ ػٌی صیش ‪30‬‬ ‫هالتًَیي ثغَس هدضا ثِ دلیل ػذم دػتشػی ثِ تخوي‬ ‫ٍ ثبالی ‪ ٍ 30‬دس ثبصُ صهبًی ‪ 24‬ػبػت تلبٍت‬ ‫ًبكی ًبؿی اص اػتلبدُ اص هذل اًؼبًی هی تَاًذ ثِ‬ ‫هؼٌیداسی دس هیضاى ثلَؽ تخوي ٍخَد ًذاؿت ٍ ایي‬ ‫ػٌَاى یي هحذٍدیت دس ایي هغبلؼِ دس ًظش گشكتِ‬ ‫یبكتِ هیتَاًذ ثب ًبّؾ ًیلیت تخوي دس ػٌذسم‬ ‫ؿَد ًِ ػلیسؿن آى‪ً ،‬تبیح اهیذٍاسًٌٌذُ ایي سٍیٌشد‬ ‫تخوذاى پلیًیؼتیي دس هوبیؼِ ثب صًبى ًشهبل هشتجظ‬ ‫خذیذ دس ساػتبی یبكتي تشًیجی هَثش ثشای هحیظ‬ ‫ثبؿذ (‪.)21 ،20‬‬ ‫دس ثیوبساى ‪ PCOS‬الْبمثخؾ اػت‪ .‬هبثل تَخِ اػت‬ ‫ًتبیح هشثَط ثِ ثبصُ ‪ 48‬ػبػت ًـبى داد ًِ دس اكشاد‬ ‫ًِ هغبلؼبت آیٌذُ تَػظ گشٍُ هب ثشای اسصیبثی خٌیي‪-‬‬ ‫صیش ‪ 30‬ػبل دس هحیظ ؿٌی ؿذُ ثب هبیغ كَلیٌَلی ٍ‬ ‫ّبی حبكل اص ایي سٍؽ ٍ ًیض ثالػتَػیؼتّبی‬ ‫هالتًَیي هیضاى ثلَؽ تخوي دس هوبیؼِ ثب ًٌتشل‬ ‫تَػؼِ یبكتِ ثب اػتلبدُ اص تَالییبثی ًؼل ثؼذی‬ ‫اكضایؾ هؼٌیداسی داؿتِ اػت‪ .‬دس ًتیدِ ؿٌیػبصی‬ ‫(‪ ٍ )NGS‬هتبثَلَهیٌغ تؼشیق‬ ‫هحیظ ًـت ثب هَاد هـزی ٍهالتًَیي هغؼب اثشات‬ ‫ثغَس خالكِ ؿٌیػبصی هحیظ ‪ IVM‬ثب ػٌشتَم‬ ‫احتوبل ٍخَد داسد ًِ پبییٌتش ثَدى ػي ثیوبس تبثیشات‬ ‫ػلَلّبی ثٌیبدی خَى هبػذگی اًؼبى‪ ،‬هبیغ كَلیٌَلی‬ ‫هٌلی ًبؿی اص عَالًی ؿذى صهبى ًـت سا خجشاى ًشدُ‬ ‫ٍ هالتًَیي دس ثبصُ صهبًی هٌبػت ثِ عَس هبثل تَخْی‬ ‫اػت‪ .‬ثٌبثشایي اگشچِ اسصیبثی ًؼجتّبی هختلق اص‬ ‫ثلَؽ تخويّبی ًبثبلؾ سا دس صًبى ‪ PCOS‬ثْجَد هی‪-‬‬ ‫رًش ؿذُ ثشای تؼییي كشهَلی‬ ‫ثخـذ ًِ ًـبىدٌّذُ ثشداؿتي گبهی سٍ ثِ خلَ دس‬ ‫هَثشهَسد ًیبص اػت‪ ،‬ثِ ًظش هیشػذ تشًیجی اصػٌشٍتَم‬ ‫ساػتبی ایدبد سٍؽّبی آػبى ٍ ًن ّضیٌِ دسحَصُ‬ ‫ػلَلّبی ثٌیبدی هـتن اص خَى هبػذگی ٍ هالتًَیي‬ ‫ثیـتشیي تبثیش سا ثش ثلَؽ تخوي دس ثیوبساى‬ ‫ؿذُ اػت‪.‬‬ ‫نتیجهگیري‬ ‫ًبؿی اص اػتشع اًؼیذاتیَ سا ًبّؾ هیدّذ ٍ ایي‬ ‫تشًیجبت هـزی‬ ‫‪IVM‬‬ ‫‪ IVF‬اػت ًِ ًِ تٌْب ثشای ‪ PCOS‬ثلٌِ ثشای صًبى ؿیش‬ ‫‪PCOS‬‬ ‫‪ً PCOS‬یض هبثل تؼوین هیثبؿذ‪.‬‬ ‫داؿتِ ثبؿذ ‪ .‬دس ثشخی اص هغبلؼبت صهبى ‪ 24‬ػبػت‬ ‫ثشای ثلَؽ تخويّب هٌبػت گضاسؽ ؿذُ ٍ ثشخی‬ ‫تشکر و قذردانی‬ ‫دیگش صهبى ّبی ‪ 24‬تب ‪ ٍ 30‬یب ‪ 36‬ػبػت سا دس‬ ‫ایي هوبلِ ثشگشكتِ اص پبیبى ًبهِ دًتشا هیثبؿذ ًِ دس ًویتِ‬ ‫تخويّبی اًؼبًی پیـٌْبد ًشدُاًذ اهب اؿلت هغبلؼبت‬ ‫اخالم پظٍّـی پظٍّـٌذُ اثي ػیٌب‪ ،‬هشًض آهَصؿی‪،‬‬ ‫اظْبس هیًٌٌذ ًِ صهبى هٌبػت ثشای ثلَؽ ًبهل تخوي‬ ‫‪011‬‬ ‫ هیلذا رستگاري و هوکاراى‬،95 -105 ‫ صفحات‬،1402 ‫ ویژهناهه‬،‫ سال شانسدهن‬،‫زیستشناسی جانوري‬ ،‫ تْشاى‬،ACECR( ‫كشٌّگی ٍ پظٍّـی داًـگبّی‬ COVID-19 patients: clinical trial phase I & II. Stem Cell Research and Therapy, 13(1):96. ‫ًذ‬ ‫ثب‬ )‫ایشاى‬ ‫ ثِ ثجت‬IR.ACECR.AVICENNA.REC.1400.013 6. Haryadi D., Sadewa A.H., Mubarika S., Dasuki D. 2019. The potential application of conditioned media-mesenchymal stem cells on human oocyte maturation in assisted reproductive technology: a quasiexperimental based-study at Dr. Sardjito General Hospital, Yogyakarta, Indonesia. Bali Medical Journal, 8(3):741-748. ‫ ثذیيٍػیلِ ًَیؼٌذگبى هوبلِ اص توبهی اكشادی‬.‫سػیذ‬ ‫ًِ دس ثِ اًدبم سػیذى ایي تحوین ػْوی داؿتِاًذ‬ .‫تـٌش ٍ هذسداًی هیًوبیٌذ‬ ‫هنابع‬ 1. Akbari H., Eftekhar Vaghefi S.H., Shahedi A., Habibzadeh V., Mirshekari T. R., Ganjizadegan A., Mollaei H., Ahmadi M., Nematollahi-Mahani S.N. 2017. Mesenchymal stem cell-conditioned medium modulates apoptotic and stressrelated gene expression, ameliorates maturation and allows for the development of immature human oocytes after artificial activation. Genes, 8(12):371. 7. Heinzmann J., Mattern F., Aldag P., Bernal-Ulloa S.M., Schneider T., Haaf T., Niemann H. 2015. Extended in vitro maturation affects gene expression and DNA methylation in bovine oocytes. MHR: Basic Science of Reproductive Medicine, 21(10):770-782. 8. Jafarzadeh H., Nazarian H., Ghaffari Novin M., Shams Mofarahe Z., Eini F., Piryaei A. 2018. Improvement of oocyte in vitro maturation from mice with polycystic ovary syndrome by human mesenchymal stromal cell–conditioned media. Journal of Cellular Biochemistry, 119(12):1036510375. 2. Akbari H., Vaghefi S.H.E., Shahedi A., Habibzadeh V., Mirshekari T.R., Shekari M.A., Nejatbakhsh R. 2018. Conditioned mediums and human oocytes in vitro maturation. International Journal of Pharmaceutical and Phytopharmacological Research (eIJPPR), 8(2):64-71. 9. La X., Zhao J., Wang Z. 2019. Clinical Application of In Vitro Maturation of Oocytes. In Embryology-Theory and Practice: IntechOpen. 3. Chen L., Qu J., Xiang C. 2019. The multi-functional roles of menstrual bloodderived stem cells in regenerative medicine. Stem Cell Research and Therapy, 10(1):110. 10. Li Y., Liu H., Wu K., Liu H., Huang T., Chen Z. J., Zhao S., Ma J., Zhao H. 2019. Melatonin promotes human oocyte maturation and early embryo development by enhancing clathrin‐mediated endocytosis. Journal of pineal research, 67(3):e12601. 4. Doroudi R., Changizi Z., NematollahiMahani S.N. 2021. Effects of melatonin and human follicular fluid supplementation of in vitro maturation medium on mouse vitrified germinal vesicle oocytes: A laboratory study. International Journal of Reproductive BioMedicine, 19(10):889. 11. Lin T., Lee J.E., Kang J.W., Oqani R.K., Cho E.S., Kim S.B., Il Jin D. 2018. Melatonin supplementation during prolonged in vitro maturation improves the quality and development of poor‐quality porcine oocytes via anti‐oxidative and anti‐ apoptotic effects. Molecular Reproduction and Development, 85(8-9):665-681. 5. Fathi-Kazerooni M., Fattah-Ghazi S., Darzi M., Makarem J., Nasiri R., Salahshour F., Dehghan-Manshadi S.A., Kazemnejad S. 2022. Safety and efficacy study of allogeneic human menstrual blood stromal cells secretome to treat severe 012 ‫ هیلذا رستگاري و هوکاراى‬،95 -105 ‫ صفحات‬،1402 ‫ ویژهناهه‬،‫ سال شانسدهن‬،‫زیستشناسی جانوري‬ 18. Shokri M.R., Bozorgmehr M., Ghanavatinejad A., Falak R., Aleahmad M., Kazemnejad S., Shokri F., Zarnani A-H. 2019. Human menstrual blood-derived stromal/stem cells modulate functional features of natural killer cells. Scientific Reports, 9(1):10007. 12. Lord T., Nixon B., Jones K.T., Aitken R.J. 2013. Melatonin prevents postovulatory oocyte aging in the mouse and extends the window for optimal fertilization in vitro. Biology of Reproduction, 88(3):67. 13. Lu C., Zhang Y., Zheng X., Song X., Yang R., Yan J., Feng H., Qiao J. 2018. Current perspectives on in vitro maturation and its effects on oocyte genetic and epigenetic profiles. Science China Life Sciences, 61:633-643. 19. Vuong L.N., Le A.H., Ho V.N., Pham T. D., Sanchez F., Romero S., De Vos M., Ho T.M., Gilchrist R.B., Smitz J. 2020. Live births after oocyte in vitro maturation with a prematuration step in women with polycystic ovary syndrome. Journal of Assisted Reproduction and Genetics, 37:347-357. 20. Yang H., Kolben T., Meister S., Paul C., van Dorp J., Eren S., Kuhn C., Rahmeh M., Mahner S., Jeschke U., von Schönfeldt V. 2021. Factors Influencing the In Vitro Maturation (IVM) of Human Oocyte. Biomedicines, 9(12):1904. 14. Madkour A., Bouamoud N., Kaarouch I., Louanjli N., Saadani B., Assou S., Aboulmaouahib S., Sefrioui O., Amzazi S., Copin H. 2018. Follicular fluid and supernatant from cultured cumulusgranulosa cells improve in vitro maturation in patients with polycystic ovarian syndrome. Fertility and Sterility, 110(4): 710-719. 21. Yang Q., Zhu L., Wang M., Huang B., Li Z., Hu J., Xi Q., Liu J., Jin L. 2021. Analysis of maturation dynamics and developmental competence of in vitro matured oocytes under time-lapse monitoring. Reproductive Biology and Endocrinology, 19(1):183. 15. Miraki S., Mokarizadeh A., Banafshi O., Assadollahi V., Abdi M., Roshani D., Fathi F. 2017. Embryonic stem cell conditioned medium supports in vitro maturation of mouse oocytes. Avicenna Journal of Medical Biotechnology, 9(3):114. 22. Zafardoust S., Kazemnejad S., Darzi M., Fathi-Kazerooni M., Rastegari H., Mohammadzadeh A. 2020. Improvement of pregnancy rate and live birth rate in poor ovarian responders by Intraovarian Administration of autologous menstrual blood derived-Mesenchymal Stromal Cells: Phase I/II Clinical Trial. Stem Cell Reviews and Reports, 16:755-763. 16. Nikmard F., Hosseini E., Bakhtiyari M., Ashrafi M., Amidi F., Aflatoonian R. 2017. Effects of melatonin on oocyte maturation in PCOS mouse model. Animal Science Journal, 88(4):586-592. 17. Plancha C. E., Rodrigues P., Marques M., Almeida J. M., Navarro-Costa P. 2021. The time is ripe for oocyte in vitro maturation. Journal of Assisted Reproduction and Genetics, 38(6):12811283. 013 ‫ هیلذا رستگاري و هوکاراى‬،95 -105 ‫ صفحات‬،1402 ‫ ویژهناهه‬،‫ سال شانسدهن‬،‫زیستشناسی جانوري‬ The Comparison of 24 and 48 Hours Culture on In vitro Maturation of Oocyte using Menstrual Blood Stem Cells Secretome in Polycystic Ovary Hilda Rastegari1, Nasim Hayati Roudbari1*, Somayeh Kazemnezhad2, Soheila Ansaripour2 1- Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran 2- Reproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR, Tehran, Iran Abstract The application of mesenchymal stem cells is a novel approach in regenerative medicine and infertility. Recently, culture enrichment using the secretome obtained from these cells, as well as the optimal time for culture, have been considered in order to improve the results of in vitro maturation (IVM), especially in women with polycystic ovaries (PCOS). The purpose of this study is comparing 24 and 48 timing on IVM using secretome of menstrual blood stem cells (MenSCs) along with follicular fluid and melatonin in PCOS women. 400 germinal vesicle oocytes were collected from 100 PCOS patients, as the best candidates for IVM, and randomly divided into four groups: control, secretome, follicular fluid and melatonin. Oocyte maturation was evaluated at 24 and 48 hours. Also, the effect patient’s age on the results of the study was evaluated in the age groups under 30 and over 30 years old in both time periods. Oocyte maturation rate showed a significant increase in 24 hours in the group enriched with secretome compared to the control (p < 0.05). Also, matured oocytes were noticeably higher in melatonin enriched group, in 48 hours, compared to the control (p < 0.001). Moreover, according to our findings, the age of the women did not have a significant effect on the oocyte maturation rate in the 24-hour culture, while in the younger age group, the oocyte maturation rate increased significantly both in secretome and melatonin groups compared to the control group. As a result, the culture time of 24 hours with IVM medium enriched by secretome is the optimal time in order to increase oocyte maturation in PCOS women. Also, the use of melatonin seems to be an effective strategy to improve egg maturation in extended culture times. Keywords: Secretome, Menstrual blood stem cells, IVM, Melatonin, Follicular fluids, PCOS. 014 ‫زیستشناسی جانوري‪ ،‬سال شانسدهن‪ ،‬ویژهناهه ‪ ،1402‬صفحات ‪ ،95 -105‬هیلذا رستگاري و هوکاراى‬ ‫‪015‬‬