Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩大

从第一次消失口内自身胰岛素到消失1改型肾病药理学病征的的其发展率在学童时期就有很好的叙述，多个口内自身胰岛素阴性的学童中都有70%在胰岛素转换后10周内中风肾病，而随访15年的学童这一比率增大到84%。相较之下，分之一药理学1改型肾病一半以上的改型1改型肾病的得病机制还没有人给予前提的数据分析。

更为多的人开始应用于有种系统种系统来定义1改型肾病的的其发展：母体在消失多种口内自身胰岛素时进到第1之前，消失高血压出现异常时进到第2之前，消失病征时进到第3之前。一些多发口内自身胰岛素阴性的母体，在1期和2期，的其发展快速，并其发展为得病的1改型肾病。我们之前叙述了两组成员在首次安全检查到多种口内自身胰岛素采样后数10年无肾病的变慢的其发展者，这组成员病患者数量极少，但相似性极其一致。随后，我们发掘出口内自身上皮细胞专一性CD8+T细胞膜质子化在的其发展快速的病患者中都基本不存在，但在近期得病和与此无关的肾病病患者中都很容易安全检查到。这也许说明，与的其发展病患者相较，这些病患者胃溃疡质子化的抑制增强。

后期数据分析说明，尽管抑制性T细胞膜(Treg)数量正常，但肾病病患者存在一些功用缺陷，其中都都有对IL-2的质子化能力减缓。此外，肾病病患者中都的effectCD4+T细胞膜也许对抑制更为具抵抗性，显出为effectT细胞膜的抑止减弱，自然造成了的Treg和肾脏造成了的诱发Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞膜中都IL-2质子化减弱。本数据分析的最终目标是叙述了CD4+抑制性T细胞膜(Treg)在一小群正因如此快速的其发展者中都的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX数据分析是一项以一些人相结合的垂直数据分析，在21岁以下确诊的病患者亲人中都安全检查1改型肾病的危险因素。我们之前叙述了长期快速的其发展者的相似性，他们保持多重口内自身胰岛素阴性超过10年，但没有人消失肾病的药理学病征，慢性或非开展性胃溃疡。随后，10名继续保持无肾病并愿意缺极少大量尿液采样的快速的其发展者拓展到T和B细胞膜功用统计分析。在目前的数据分析中都，8名慢的其发展者(SP组成员)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的口内自身胰岛素阴性。所有的参与者都属于1改型肾病的其发展的1期，尽管一些人随后夺去了口内自身胰岛素对某些上皮细胞的阴性质子化，然而，一名病患者早就属于2期数6年，但没有人消失药理学病征，一名病患者被病因为肾病，该病患72岁，在采集实验室采样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中都对该NADPH开展了分开评估。转化外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采行多参数流式细胞膜奥义和T细胞膜抑止检验评估NADPH中都Treg的阈值、表改型和功用。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、密切无关和回归)开展无指导聚类统计分析，评估Treg表改型。

结果：与健康NADPH相较，来自慢的其发展体的梦境CD4+T细胞膜的指导聚类揭示，触发的梦境CD4+ Treg阈值增大，与抑制作用诱发的TNFR无关蛋白(GITR)对此增大有关。一名HbA1c下降时的病患者与的其发展快速者和冗余的准确率成员相较，Treg曲谱有所并不相同。功用统计分析说明，与健康NADPH相较，来自快速的其发展体的Treg专一性的CD4+effectT细胞膜抑止相对来说受损。显出为对effectCD4+T细胞膜CD25和CD134对此的抑止增大。

三幅1 深入的表改型统计分析揭示，CD4+Treg亚改型在慢的其发展缓冲区中都增大。由FlowSOM转换成的Treg室，组织起来在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上标物对此检验出10个元簇:梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)应用于9个并不相同Treg上标转换成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个协同(100个协同)，更为大的元协同(10个元协同)在数据流组成员远处成品。每个数据流中都的饼三幅对此单个上标的对此级别。(b)每个元聚类的热三幅，以揭示整体上标对此。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转换成三幅，以及FlowSOM辨别的每个元簇的大块。(e-l)一般来说数量级为每个metacluster装有本站三幅(数量级> 0.05%)确定为HD和SP组成员:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞膜(l)。紫色圆圈代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon冗余大写字母秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 应用于CITRUS的预测模改型证实，Treg阈值的增大是的其发展快速的标志。分级专一性(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比起SP参与者和冗余的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的别具特色三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR对此开展转化，实时FlowSOM个体。(b) HD(外缘)和SP(虎纹)组成员以及NADPHSP 606(紫色)中都CD25+ cd127的阈值简介三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+专一性孙空集的装有本站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3对此强度着色，圆圈醒最终目标簇被辨别为SP和HD缓冲区间的并不相同。(j)装有本站三幅揭示了在SP(虎纹)和HD(灰点)组成员中都，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的一般来说数量级(比率)。(k)直方三幅揭示每个簇的表改型(粉色)和Treg上标一般来说对此与氛围对此(金色);上列，存储器Treg_3;前面几天后，存储器Treg_4。氛围与所有其他簇中都上标的对此有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon冗余大写字母秩检验

三幅3 与健康献血者相较，的其发展快速者梦境treg的GITR增大。每个梦境CD4+T细胞膜元簇(梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)安全检查每个对此上标的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的对此热三幅(sp606不都有在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中都所有HD(蓝灰色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR对此串联，揭示直方三幅(c)和简介三幅(d)。Wilcoxon冗余大写字母秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NADPH都有，p< 0.05(金色)NADPHSP 606和冗余的HD不都有在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR对此，从分级专一性，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)串联，揭示直方三幅(e)和简介三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon冗余大写字母秩检验

三幅4 来自快速的其发展的CD4+ treg细胞膜操纵effectCD4+T细胞膜的能力减缓。SP组成员用金色的本站和圆圈对此，HD组成员用紫色的本站和圆圈对此，紫色的本站/圆圈对此NADPHsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上标为CFSE, Treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞膜，培育出3翌日开展流式细胞膜奥义安全检查。(a-d)与CD4+这样的话者一般来说应的treg培育出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育出。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止一般而言。应用于阴性对照(触发的组织起来细胞膜都有treg)计算抑止一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

三幅5 effectCD4+T细胞膜对快速的其发展的T细胞膜再生的抑止更为极端。SP组成员用金色的本站和圆圈对此，HD组成员用紫色的本站和圆圈对此，紫色的本站/圆圈对此NADPHsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上标，treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞膜，培育出3翌日开展流式细胞膜奥义(CD25反染)和细胞膜因孙子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育出。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止花红(b)。(c,d) CD25抑止花红(c)和CD134抑止花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中都的对此。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

结论：我们得出的结论是，来自快速的其发展孙子的再生梦境CD4+Treg在GITR对此中都给予了拓展和丰富，务实了进一步数据分析Treg在1改型肾病危险性母体中都的异质性的必要性。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28